1）冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
人非小细胞肺癌细胞A549使用注意事项
1.实验前应检查细胞的稳定性，确保细胞的纯度和活性。
2.实验中应使用无菌技术，以避免外界污染对实验结果的影响。
3.使用培养基时应严格按照厂家说明书的要求制备，保证培养基的质量。
4.A549细胞应在体外培养，并在合适的温度（37℃）和湿度（5%CO2含量）下进行实验。
5.建议使用合适的细胞培养基，例如DMEM/F12，RPMI1640等。
6.需要注意细胞的传代，细胞传代时必须在适当的细胞密度下移植细胞，以避免过度生长和细胞间的相互作用。
7.确保试剂的稳定性和储存条件，以保证实验的准确性和重复性。
8.需要预先准备药物浓度和时间等相关信息，以确保实验的可重复性和较好的控制。
9.进行实验时应尽量减少操作时间，以避免对细胞活性的影响。
10.应尽可能避免使用有毒物质及危险试剂，保证实验的安全性。
